在細胞治療、干細胞研究及生物制藥領域，
細胞凍存袋是替代傳統凍存管的大容量存儲載體，可滿足數百毫升級細胞的冷凍需求。正確使用凍存袋，是確保細胞長期存活率與功能活性的核心環節。
一、使用前準備：嚴格篩選與預處理
首先需根據細胞類型與計劃存儲量（通常50-500mL）選擇適配規格的凍存袋。使用前需檢查包裝完整性，并在超凈工作臺內拆封。將凍存袋平鋪于無菌操作臺面，連接配套的輸液管與接頭，確保無扭曲或折疊。同時，提前將程序降溫儀預冷至4℃，并將冷凍保護劑置于4℃環境平衡，以減少對細胞的滲透損傷。
二、細胞懸液轉移：無菌操作是核心
在生物安全柜中，將培養好的細胞經離心去除舊培養基后，用預冷的凍存液重懸，調整細胞密度至1×10?-5×10?個/mL。通過無菌接管機或酒精燈火焰消毒后的接頭，將細胞懸液緩慢注入凍存袋。裝液量需控制在袋體最大標記容量以下，完成后用無菌夾夾閉輸液管末端。
三、程序降溫：精準控溫保活性
將裝有細胞懸液的凍存袋平放于程序降溫儀的樣品艙內，設置標準降溫程序：4℃保持10分鐘→以1℃/min速率降至-40℃→再以10℃/min速率降至-90℃。部分實驗室若無程序降溫儀，可用自制梯度降溫盒，但需注意異丙醇需每3個月更換一次，且降溫速率約為-1℃/min，略遜于專業設備。整個過程需避免震動或傾斜凍存袋，防止細胞懸液分布不均。
四、長期存儲與復蘇準備
當凍存袋溫度達到-90℃后，應立即轉移至液氮罐（-196℃）中長期保存。復蘇時，需提前將凍存袋從液氮罐取出，迅速放入37℃水浴鍋，待內容物全部解凍后，通過無菌操作轉移至離心管，離心去除冷凍保護劑，最后用新鮮培養基重懸并接種培養。
從準備到存儲，細胞凍存袋的使用環環相扣，每個步驟都直接影響細胞活性。嚴格遵循標準化流程，才能為細胞治療研究提供穩定可靠的“生物銀行”。
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更新時間：2025-09-26 
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